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Autofagia

Proceso de la Autofagia

Los cambios en el metabolismo juegan un importante rol en la capacidad de la célula a adaptarse al estrés. Cuando el cuerpo es expuesto a diversas fuentes de estrés, la respuesta puede darse en una variedad de formas como, activando vías que promuevan la supervivencia a la muerte celular [1].

Cuando estímulos nocivos no son resueltos, la célula activa vías de señalización de muerte. La supervivencia de la célula depende de la capacidad de montar una respuesta apropiada frente al estrés ambiental o intracelular. La célula trata de defenderse y recuperarse de la agresión externa [2].

De acuerdo al nivel de estrés, la célula puede establecer diferentes tipos de mecanismos de defensa y estrategias de supervivencia. Si éstas estrategias no son exitosas, la muerte celular programada es activada, con el objetivo de eliminar el daño celular del organismo [2].

Una de éstas respuestas es la autofagia. Éste proceso es regulado por la vía de degradación lisosomal que mantiene la homeóstasis celular y actúa como un regulador que controla la calidad del citoplasma, eliminando proteínas que se agregan y organelos dañados, dentro de una vesícula con doble membrana, conocida como autofagosoma [1].

El proceso de autofagia comienza, cuando el autofagosoma maduro se fusiona con el lisosoma para formar un autolisosoma, dónde  el contenido citoplasmático es degradado [3]. Ésta vía de degradación controla muchos mecanismos fisiológicos y biológicos durante la patogénesis de diversas enfermedades.  Hallazgos recientes han mostrado que la autofagia es un proceso catabólico conservado en la mayoría de organismos eucariontes a la respuesta al estrés tal cual la limitación de nutrientes [4].

El descubrimiento de los genes relacionados a la autofagia en levadura inicialmente, ha mejorado el conocimiento de mecanismos moleculares involucrados en el control de la autofagia [4].

Este proceso es típicamente observado en células que están expuestas a estrés metabólico y terapéutico, incluyendo la limitación de factores de crecimiento, inhibición del receptor de la tirosina quinasa,  La vía de señalización de  la diana de rapamicina en células de mamífero o mTOR, limitación de nutrientes, isquemiainhibición de la degradación proteasomal y estrés a nivel del retículo endoplasmático [2].

En el caso de estrés en el retículo endoplasmático, se ha mostrado que la autofagia es inducida a través de la activación del sensor de la respuesta a proteínas desplegadas (UPR) IRE1 y la activación “downstream” de la quinasa c-Jun N terminal (JNK), el cual puede regular la disociación de Beclin-1 [5].

Beclin-1 es una proteína que es producto de un gen supresor de tumores y el homologo en mamíferos del gen 6 relacionado con la autofagia (Atg6) y forma un complejo multiproteínico con Vps34 [1] [3]. La ATGs regula varios en el proceso de autofagia [6]. Ellos forman diversos complejos proteínicos en pasos secuenciales controlando la formación del autofagosoma [6].

El complejo multiproteínico se une también con la fosfatidilinositol 3 – quinasa de clase II, UVRAG (UV irradiation resistance associated tumor suppresor gene),  y una quinasa miristilada (Vps, ó p150 en humanos) [2].

El complejo multiproteínico es requerido para la iniciación del autofagosoma. Cuando éste complejo se forma, Vps34 se activa y cataliza la generación de fosfatidilinositol 3 – fosfatasa, el cual es requerido para la nucleación de vesículas [2].

Las especies reactivas al oxígeno (ROS) puede ser una fuente común de estrés celular y de autofagia. La acumulación de ROS ha sido reportada como resultado de la inactivación de la cisteína proteasa ATG4, la cual causa la acumulación del precursor de la ATG8 – fosfoetanolamina requerida por el ROS para la iniciación de la formación del autofagosoma. En algunas circunstancias, la autofagia constituye una ruta alternativa a la muerte celular, mientras que en algunas circunstancias, es una ruta alternativa a la muerte celular [2] [1].

Recientemente, los científicos debaten sobre cuando la autofagia es protectiva o tóxica para las células. Las evidencias sugieren que tiene roles beneficiosos en el corazón bajo condiciones fisiológicas [2].

Se ha demostrado que la autofagia regula la renovación intracelular de proteínas y organelos en el corazón y protege contra estrés hemodinámico. En concordancia con éste reporte, la rapamicina, el cual induce la autofagia inhibiento mTOR, puede proteger el miocardio contra la isquemia/lesión por reperfusión [2].

Por otro lado, existe reportes contradictorios de la regulación negativa  de los factores de transcripción (ATF5 o ATF7). El uso de el siRNA previene el estrés inducido por la muerte celular, sugiriendo, que el nivel o el tiempo de la autofagia puede ser crítico para decidir el destino de la célula.

A un nivel molecular existe evidencias de comunicación entre la apoptosis y la autofagia, particularmente en relación con la familia Bcl-2. Éstas interrogantes requieren más estudios con el objetivo de describir los mecanismos y vías que involucran todos estos procesos

 

Referencias:

1) Goldsmith, J., Levine, B., Debnath, J. (2014) Chapter 2 – Autophagy and Cancer Metabolism. Methods in Enzymology Vol. 542 p. 25-57.

2) Fulda, S., Gorman, A. M., Hori, O., & Samali, A. (2010) Cellular stress responses: cell survival and cell death. International journal of cell biology, 2010.

3) Chen, Steve S.L., Ke, Po-Yuan (2014). Chapter 9 – Suppression of Innate Antiviral Immunity after Hepatitis C Virus Infection: Role of the Unfolded Protein Response and Autophagy. Autophagy: Cancer, Other Pathologies, Inflammation, Immunity, Infection, and Aging., p. 137-159

4) Besteiro, S., (2014) Chapter 12 – Autophagy in Parasitic Protists, Autophagy: Cancer, Other Pathologies, Inflammation, Immunity, Infection, and Aging, p. 185-195.

5) Vidal, R. L., Matus, S., Bargsted, L., & Hetz, C. (2014). Targeting autophagy in neurodegenerative diseases. Trends in pharmacological sciences.

6) Duque, T. L. A., Souto, X. M., de Andrade-Neto, V. V., Ennes-Vidal, V., & Menna-Barreto, R. F. S. (2013). Autophagic Balance Between Mammals and Protozoa: A Molecular, Biochemical and Morphological Review of Apicomplexa and Trypanosomatidae Infections.

WSSV - Scheme

Características y distribución del WSSV en América

El Virus del Síndrome de la Mancha Blanca (WSSV), es un virus de ADN de doble cadena del género Whispovirus, familia Nimaviridae (Zhang et al 2006); cuyo genoma tiene un tamaño aproximado de 290 kpb. Este virus es uno de los microorganismos patógenos más complejos que afectan al camarón (Lightner & Pantoja, 2003).

La infección puede ser transmitida de forma vertical (trans-ovum), horizontalmente por el consumo de tejido infectado (canibalismo) y a través del agua de los estanques. Los camarones moribundos pueden ser una fuente de transmisión de la enfermedad a camarones sanos (OIE, 2008).

Se ha reportado que durante la fase aguda de la enfermedad, los camarones tienden a mostrar una reducción en el consumo de alimento, se vuelven letárgicos, la cutícula se desprende fácilmente y presentan manchas blancas de aproximadamente 0.5 a 2.0 mm de diámetro, las cuales son más evidentes en la parte interna del caparazón (Lightner & Pantoja, 2003).

Las poblaciones de camarones que presentan estos síntomas clínicos tienen a exhibir altas tasas de mortalidad acumulada, alcanzando hasta el 100%, alrededor de los 3 a 10 días posteriores a los primeros síntomas (Lightner & Pantoja, 2003). Los brotes de la enfermedad pueden ser inducidas por factores de estrés, por ejemplo: la temperatura del agua  tiene un profundo efecto en la expresión de la enfermedad, con temperaturas promedio debajo de los 30°C (OIE, 2008).

El primer brote de WSSV fue reportado en Japón en 1993 y actualmente es uno de los virus de mayor interés por su virulencia y por las grandes pérdidas económicas que genera en la industria camaronera. En Abril de 1999 se reportó el primer caso en Panamá y se ha dispersado a México, Nicaragua, Honduras, Costa Rica, Ecuador y Colombia (Lightner & Pantoja, 2003).

En Panamá después del brote inicial se obtuvo un porcentaje de supervivencia de larvas en el primer ciclo del año de un 3%, lo cual afecta gravemente la economía y la funcionalidad de las empresas camaroneras en el país (González R., 1999).

La cría científica de camarones se inició en el año de 1974, cuando la Compañía Agromarina de Panamá S.A. inicia operaciones. Las áreas donde se cría el camarón están localizadas cerca del mar en la Costa del Pacífico, siendo las más aptas aquellas que están en la parte Oeste de la ciudad de Panamá y al Este de la Península de Azuero (Pretto 1982).

Desde la aparición del WSSV en el país, se cerraron numerosas compañías dedicadas a la cría del camarón, se estimó que solo en la región de Aguadulce, los despidos ocasionados como consecuencia de los cierres de las plantas afectaron a 400 personas. Los brotes iniciales del síndrome de la mancha blanca generan mortalidades elevadas, perjudicando al 80% de la industria (González R., 1999).

Nested PCR - WSSV

Procedimiento de la PCR Anidada

Dentro de la pruebas diagnóstica se han diseñados protocolos de PCR anidado (Lo et al). Esta modalidad consiste en realizar una PCR a partir del producto de una PCR previa . Las ventajas que aporta esta metodología es aumentar la sensibilidad de la reacción, además se puede emplear como método de tipificación (Ceccotti & Sforza, 2007).

La cantidad de muestra sugerida es de 100 a 200 gramos de tejido de camarón tales como, pleópodos. Otro tipo de muestra es una cantidad mínima de 11 post-larvas (juveniles o subadultas), 10 post-larvas completas o 100 μL de hemolinfa (OIE, 2008).

Se debe cuidar que las muestras de ADN estén preparadas con los tejidos adecuados y que la temperatura de los ciclos sea la apropiada (particularmente para la hibridación, la temperatura recomendada es de 62°C). Es importante prevenir la posibilidad de resultados falsos positivos, especialmente cuando se evalúan áreas libres de la enfermedad y nuevos hospederos del WSSV (OIE, 2008).

Un resultado positivo en el primer paso de amplificación implica una infección fuerte por WSSV, mientras que un resultado positivo en la segunda amplificación muestra una infección latente o de portador. Para el diagnóstico de la incidencia de WSSV en un nuevo huésped o en un estudio en una zona libre de WSSV, se recomienda emplear la secuenciación del ADN para confirmar los resultados positivos de la PCR (OIE, 2008).

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Fuente:

  • Organización Mundial de Sanidad Animal (OIE) 2008, White Spot Disease, en Manual of Diagnostic Tests for Aquatic Animals, 5ed., consultado el: 14 de Septiembre de 2011, disponible en: http://www.oie.int/fileadmin/Home/eng/Health_standards/aahm/2010/2.2.05_WSD.pdf
  • Pretto R 1982, Breve Descripción de la Tecnología de la Cría de Camarones Peneidos en Panamá, Instituto de Investigación Agropecuaria de Panamá (IDIAP).
  • Zhang J, Dong S, Tian X, Dong Y, Liu X, Yan D 2006, Studies on the rotifer (Brachionus urceus Liennaeus, 1758) as a vector in White spot síndrome virus (WSSV) transmission, Aquaculture, vol. 261, no 4, p. 1181-1185.

Cromatografía

La Cromatografía es un método físico de separación en el cual, los componentes a ser separados son distribuidos entre dos fases, una de las cuales es estacionaria, mientas que la otra se desplaza en una dirección definida. La fase móvil pasa sobre y a través de la fase estacionaria. Los componentes de la mezcla idealmente se equilibran o se separan de forma diferencial entre las dos fases, resultando en diferentes velocidades de migración en el sistema en proporción a su interacción con la matriz sorbente.

El proceso de sorción y desorción  ocurre varias veces a medida que la molécula se mueve a través de la matriz y el tiempo que requiere depende principalmente de la propoción de tiempo en que es sorbido y mantenido inmóvil. La separación es efectuada en varios componentes de la matriz a diferentes tiempos, lo que es conocido como tiempo de retención.

El modo de interacción entre los componentes y las dos fases pueden ser clasificadas en dos tipos, aunque muchos procesos de separación son combinaciones de ambas. Si la muestra es atraída a la superficie de una de las fases (usualmente la superficie de la fase estacionaria sólida) el proceso es conocido como adsorpción. Alternativamente, si la muestra difunde en el interior de la fase estacionaria, el proceso es llamado partición.

La fase móvil puede ser líquido o un gas. Basado en la naturaleza de la fase estacionaria y móvil las técnicas cromatográficas se pueden clasificar como se muestra a continuación:

  •  Cromatografía de Adsorpción: Esta basada en la diferencia en los coeficientes de adsorpción. La fase estacionaria puede ser un sólido por ejemplo, aluminio, óxido de magnesio, gel de silica, etc. Los solutos son adsorbidos en partes diferentes en la columna. Los componentes adsorbidos son eluidos pasando un solvente apropiado a través de la columna.
  • Cromatografía de Partición: La fase estacionaria puede un líquido fuertemente adsorbido en un sólido que funciona como soporte. En este caso, el soluto se distribuye entre la fase estacionaria en la fase móvil líquida.
  • Cromatografía de gas: Este tipo de cromatografía se da en fases móviles que consisten en mezcla de gases o cromatografía de fase de vapor.

El método cromatográfico de sepraración, en general, conlleva los siguientes pasos:

  • Adsorpción o retención de substancias en la fase estacionaria: La fase estacionaria puede ser un sólido o líquido y la fase móvil puede ser un líquido o gas.
  • Separación de las substancias adsorbidas: La separación ocurre porque la combinación de dos o más factores como las velocidades de migración, la capilaridad, grado de adsorción, etc.
  • Recuperación de las sustancias separadas por un flujo continuo de la fase móvil (elución)
  • Análisis cualitativo y cuantitativo de las sustancias eluidas.

Los métodos cromatográficos pueden ser clasificados en base a su fase estacionaria y la fase móvil utilizada. En las columnas cromatográficas cuyo principio es la adsorción, la fase móvil líquida se le deja percolar sobre la fase estacionaria; que generalmente se encuentra empacada en una columna vertical. La fase estacionaria compite por el soluto por adsorción y la fase líquida móvil compite por el soluto por disolución.

En este tipo de cromatografía a veces, ambas fases son líquidas. El método es entonces llamado, cromatografía de partición. El líquido usado como fase estacionaria es esencialmente insoluble en el líquido usado como fase móvil. Generalmente la cromatografía de partición es realizada humedeciendo la matriz sólida con el líquido que va a ser utilizado como fase estacionaria, después de este procedimiento la matriz sólida es empacada en la columna. El líquido entonces se inmoviliza y se vuelve la fase estacionaria. La separación de substancias en este caso se debe a las diferencias en la solubilidad de los solutos en dos líquidos. Este proceso se conoce también como cromatografía de partición en columna

La clasificación mencionada previamente se basa en las fases involucradas en el proceso cromatográfico, existe una gran variedad de combinaciones de fases y procesos que incrementan el gran número de métodos con nombres propios:

  • Cromatografía líquida: una clasificación útil de las diversas técnicas de CL esta basado en el mecanismo de distribución aplicado en la separación.  En la práctica la mayoría de las separaciones en CL son resultado de mecanismos mixtos de separación.
    • Separación por Fase Normal: En cromatografía líquida de fase normal, la fase estacionaria es una sustancia polar y la fase móvil es generalmente una mezcla de solventes no acuosos. Compuestos no polares que son solubles en hexano pueden ser analizados por cromatografía de fase normal en sílica o alumina.
    • Separación por Fase Reversa: La mayoría de las aplicaciones en cromatografía líquida son realizadas con la metodología de fase reversa, donde tenemos una fase estacionaria no polar y una fase móvil polar. La cromatografía líquida de fase reversa es aplicada para el análisis de analitos iónicos y polares, los cuales no son compatibles con los análisis en cromatografía de gases. La cromatografía de fase reversa presenta mayores aplicaciones en compuestos con una amplio rango de polaridades y compuestos que la metodología de Fase Normal.
    • Cromatografía electrocinética: Esta metodología es llevada a cabo en tubos capilares y la movilidad es generada por la aplicación de un potencial eléctrico pero la separación se logra como resultado de la interacción con una fase estacionaria micelar, formada por surfactantes y agregados a la fase móvil. de esta forma la cromatografía electrocinética, une los elementos de la cromatografía líquida y de la electroforesis capilar.
    • Cromatografía de Afinidad: Las biomoléculas son purificadas utilizando técnicas que separan de acuerdo a las diferencias en propiedades específicas. Esta técnica separa proteínas en base a su interacción reversible con ligandos acoplados a una matriz cromatográfica.
    • Cromatografía de Exclusión molecular: Separa moléculas de acuerdo a las diferencias en tamaños a medida que pasan a través de un medio de filtración empacado en una columna. Esta técnica es apropiada para biomoléculas que pueden ser sensitivas a cambios en el pH, concentración de metales iónicos o cofactores. La matriz es porosa compuesta por partículas esféricas con estabilidad física y química. La matriz es equilibrada con buffer el cual llena el espacio entre los poros y las partículas
    • Cromatografía de Intercambio de Iónico: Las biomoléculas son separadas de acuerdo a las diferencias en su carga neta de superficie. Esta técnica es empleada frecuentemente en purificación de proteínas, peptidos, ácidos nucleicos y otras biomoléculas cargadas ofreciendo una alta resolución. La técnica es capaz de separar especies moleculares que tengan solo pequeñas diferencias en sus propiedades, en este caso la carga. El intercambio iónico se basa en las diferencias de las afinidades de analitos individuales.
  • Cromatografía de gases: Las muestra es normalmente introducida como vapor en la columna cromatográfica, la solubilidad de cada componente en la fase gaseosa es dependiente de su presión de vapor y causa que las moléculas de cada componente se particionen entre la fase móvil y la fase estacionaria. Siempre que una molécula entra en su fase gaseosa ésta es barrida al detector por el flujo del gas transportador. Finalmente, los compuestos que presenten diferencias en sus propiedades físicas y químicas llegarán al detector en tiempos diferentes. La fase estacionaria puede ser sólida o un líquido cubriedo una soporte sólido inerte.

En cromatrografía, el detector mide un parámetro físico del efluente de la columna o de los componentes de la columna y los transforma en una señal eléctrica. Un detector universal mide un grupo de propiedades del efluente, mientras que un detector específico mide un parámetro particular.

Un detector puede ser un dispositivo sensible a las concentraciones , el cual da una señal que es en función de la concentración de un analito en la muestra, o un dipositivo sesible al flujo de masas; dónde la señal es proporcional al flujo de masas del analito. Junto al espectrómetro de masas, una serie de otros detectores se utilizan en diversas aplicaciones:

  • El detector UV  de absorbancia: éste detector es el más empleado en cromatografía líquida, el cual es un detector específico con una amplia gama de aplicaciones. La detección es basada en la absorción de fotones por un cromóforo táles como: anillos aromáticos, dóbles enlaces y algunos hetero-átomos. De acuerdo a la ecuación de Lambert-Beer, el detector UV es un dispositivo sensible a la concentración.
  • Detector de fluorescencia: es un detector específico y sensitivo a la concentración. Esta basado en la emisión de fotones por molécuas excitadas electrónicamente. La fluorescencia es especialmente observada por analitos con grandes sistemas de anillos conjugados, hidrocarburos aromáticos polinucleares y sus derivados.
  • Detector de dispersión de luz evaporativo: es un detector universal basado en la habilidad de las partículas de causar la dispersión de fotones cuando ellas atraviesan un haz de rayo policromático o luz. El líquido efluente de CL es nebulizado. El aerosol resultante es dirigido a través del rayo de luz. Éste detector es un dispositivo sensitivo al flujo de masas, el cual provee una respuesta directamente proporcional a la masa del analito no volátil. Cómo puede detectar compuestos que no son detectables en otras técnicas de detección, el detector es frecuentemente usado en conjunto al espectrómetro  de masas con el propósito de obtener el análisis completo de la muestra.
  •  Detector térmico de conductividad: Es un detector sensitivo a la concentración, no destructivo, universal que responde a la diferencia de conductividad térmica del gas puro y el gas portador del analito. El DTC es generalmente usado para detectar gases permanentes, hidrocarburos ligeros y compuestos que respondan pobremente al detector de ionización de flama.
  • Detector de ionización de flama: Con una respuesta casi universal a compuestos orgánicos, bajos límites de detección, estabilidad a largo plazo, simplicidad en su operación y construcción. El DIF, responde a la combustión de compuestos orgánicos en una pequeña llama de difusión de hidrógeno. El gas transportador de la columna es mezclado con hidrógeno y quemado en un pequeño orificio en una cámara a través del cual sale el exceso de aire. Un electrodo colector cilíndrico es localizado a pocos milímetros sobre la flama y la corriente de iones es medida por pequeños voltajes establecidos.

Referencias

  1. Wixom RL, Sehrke CW. (2011) Chromatography: A Science of Discovery, Ed. Wiley and Sons
  2. Niessen Wilfried MA. (2006) Liquid Chromatography – Mass Spectrometry, 3rd edition, Ed. Taylor and Francis.
  3. Miller JM., (2005) Chromatography: Concepts and contrast, Ed. Wiley.
 

Macrófagos Peritoneales

Los macrófagos del tejido conjuntivo, son parte del sistema fagocítico mononuclear. Las células precursoras de los macrófagos del tejido conjuntivo son unidades formadora de colonias de macrófagos o de  los monocitos, que provienen de la médula ósea. Su característica distintiva es la capacidad de fagocitar y almacenar sustancias lo cual conlleva tres divisiones previas antes de ser liberado: monoblasto, promonocito y monocito.

Los fagocitos tienen formas irregulares, son aplanados y con frecuencia exhiben prolongaciones que parecen pseudopodos. Su núcleo de ubicación excéntrica es más pequeño y de cromatina más densa que el del fibroblasto. La organización citoplasmática es particularmente llamativa en las fotomicrografías electrónicas. Además de las organelas celulares habituales hay vesículas pequeñas, vaciolas, filamentos e inclusiones osmiófilas. éstos pueden ser lisosomas primarios, lisosomas secundarios o a menudo también inclusiones, que se han convertido en parte del fagolisosoma o cuerpos residuales.

En la microscopía óptica los macrófagos con frecuencia exhiben un “citoplasma granular”. La inyección in vivo de un colorante vital   (azul tripán, carmín litinado o incluso de tinta china) tiñe selectivamente los macrófagos porque éstas células fagocitan estos colorantes y los almacenan en su citoplasma en forma de gránulos visibles con el microscopio óptico.

Durante los procesos inflamatorios, la mayoría de los macrófagos se derivan de los monocitos sanguíneos. Dentro del tejido, los macrófagos se activan mediante estímulos y cambian dramáticamente su fisiología. En los periodos de fagocitosis muy activa, los macrófagos adquieren un diámetro de unos 20um y son por cierto voluminosos Sus prologaciones citoplasmáticas pueden parecer tentáculos o garfios. Estas células son capaces de desplazarse dentro del tejido conjuntivo por movimientos ameboides.

Los macrófagos se pueden obtener de innumerables fuentes y presentan diferencias bien establecidas en cuento a propiedades funcionales, dependiendo de su fuente de origen. Es posible cultivar grandes cantidades de macrófagos peritoneales en modelos animales a partir de la cavidad peritoneal varios días después de la inyección de agentes estimulantes, como glicógeno, aceite mineral, caseína, caldo de tioglicolato etc.  También pueden cultivarse a partir de los pulmones (por lavado o después de triturar), hígado, bazo o ganglios linfático (después de triturar).

Estas células residentes del peritoneo han sido ampliamente estudiadas y la mayoría de nuestro entendimiento proviene de la investigación en este tipo celular.  Generalmente el número de macrófagos presentes en el peritoneo sin previa estimulación es insuficiente para un experimentos extensivos.

Por ello para estudios a mayor escala se emplean estos agentes que,  incrementan la migración de monocitos dentro del peritoneo aumentando de esta forma el rendimiento. Aunque estos agentes incrementan el número de macrófagos, existe cierta preocupación en relación a si estos agentes afectan la fisiología de estos macrófagos. Una alternativa propuesta en relación a la obtención de grandes número de macrófagos residentes es a través del empleo de Factor estimulante de colonias de Macrófagos (M-CSF) para diferenciar la célula progenitora de macrófagos de la médula ósea en macrófagos maduros en el cultivo.

Las pruebas funcionales y bioquímicas que pueden realizarse son incontables. Las que pueden tener valor en medicina clínica son las de respuestas a quimiotaxinas y linfocinas, su capacidad de ingerir y destruir microorganismos y capacidad de matar células objetivo. La población a estudiar en el hombre se aísla, por lo común, de la sangre periférica (monocitos).

Los macrófagos son conocidos por producir y liberar una variedad de citoquinas, incluyendo Tumor Necrosis Factor (TNF) e interleuquinas, en respuesta a la estimulación por endotoxinas in vivo e in vitro. Niveles de 0.5 ng/mL pueden incrementar significativamente la producción de Interleuquina 6 en macrófagos peritoneales equinos después de solo 6 horas de exposición.

Otro tipo de población de macrofagos son los macrófagos alveolares que utiliza primariamente oxidación fosforilativa aeróbica más que la glicolisis para la obtención de energía. El aislamiento de estas células es mucho más laborioso en relación a otras extracciones debido al gran número de estas células que no son fácilmente de pulmones murinos.

1. Wolfgang Kühnel () Células libres del tejido conjuntivo – Macrófagos, Atlas Color de Citología e Histología, Editorial Medica Panamericana

2. J. Wesley Alexander () Pruebas de la función de los macrófagos, Principios de inmunología Clínica, Editorial Reverté

3. Sigma Life Science (2012)  Cell Culture Manual 2011-2014, Technical Information, SIGMA-ALDRICH, 339.

4. Zhang X, Goncalves R, Mosser DM (2008) The Isolation and Characterization of Murine Macrophages, Curr Protoc Immunol. 2008 November.

Aedes aegypti - Aedes albopictus

Aedes aegypti vs Aedes albopictus

El mosquito Aedes aegypti es conocido a nivel mundial por ser el vector transmisor del virus del dengue.  Se reporta anualmente alrededor de 50 a 100 millones de casos. Sin embargo existe otro mosquito del género Aedes involucrado en la transmisión del dengue, este mosquito es el Aedes albopictus (Skuse). Este mosquito tiene características muy particulares que lo distinguen del Ae. aegypti.

Algunas de características del Aedes albopictus son: a) puede reproducirse en agua limpia o contaminada b) puede reproducirse en estación seca o lluviosa c) Puede transmitir de forma vertical el virus del dengue d) En el sudeste asiático es transmisor del virus del chikungunya (causante de debilidad severa). En cambio el Aedes aegypti prefiere solo el agua limpia y se propaga únicamente durante la época lluviosa.

En los últimos 30 años el Ae. albopictus ha viajado alrededor del mundo a través del movimiento comercial humano en barcos y aviones. Se ha esparcido desde el Sudeste asiático y las Islas del Pacífico a Europa, Norte y Sur América, África, Medio Oriente y el Caribe. En Panamá ya se ha reportado la presencia de este mosquito principalmente en la región metropolitana, en barriadas como: Bethania, San Francisco y Carrasquilla.

Esta especie tiene una gran plasticidad ecológica, incluso algunas cepas tienen la capacidad de poner huevos en estado de diapausa convirtiéndolo en una especie altamente invasiva. Tenemos el caso del brote del virus de chikungunya en la India en el año 2006 – 2007, en el que se determinó que una mutación de un sólo nucleótido en el virus produjo un aumento significativo en su infectividad en el Ae. albopictus. En la ausencia de una vacuna realmente efectiva contra los virus del dengue y chikungunya, las estrategias en el control del vector son cruciales.

BS - PiggyBac

Ejemplo del Mecanismo del Transposón PiggyBac – System Bioscience /http://www.systembio.com/piggybac

Los métodos convencionales para controlar los criaderos del mosquitos no ha sido adecuadas para controlar el Ae. albopictus. Incluso se explora nuevos métodos a través de la ingeniería genética para crear mosquitos genéticamente modificados que eliminen a la población blanco o que reemplace con una cepa patógeno-resistente. Tenemos por ejemplo la transgénesis, que es una herramienta esencial requerida para desarrollar estos métodos de control . Por ello es de alto interés establecer una línea germinal de transformación para el Ae. albopictus.

El transposón PiggyBac (PB) es un elemento móvil genético que eficientemente transpone entre vectores y cromosomas a través del mecanismo “cortar y pegar”. Durante la transposición, la transposasa del PB reconoce unas secuencias invertidas terminales repetidas específicas al transposón ubicadas en ambos extremos del vector del transposón y eficientemente mueve el contenido de los sitios originales  y los integra dentro de los sitios cromosomales TTAA.

Los elementos transponibles como el PiggyBac forman parte rutinaria hoy día de los protocolos de transformación de la línea germinal de insectos, incluyendo al mosquito Aedes aegypti, este elemento transponible de clase II se inserta dentro de la secuencia TTAA. El PiggyBac se ha utilizado de forma exitosa en la transformación de un amplio rango de especies de insectos de diversas ordenes incluyendo, Diptera, Lepidoptera, Hymenoptera y Coleoptera.

Glosario:

  • Diapausa: Es un estado fisiológico de inactividad con factores desencadenantes y terminantes bien específicos. Se usa a menudo para sobrevivir condiciones ambientales desfavorables y predecibles, tales como temperaturas extremas sequía o carencia de alimento.
  • Línea germinal: Es el conjunto de células localizadas en las gónadas, que se convierten en gametos a través de una división celular única en las gónadas que es la meiosis, al contrario que las células de la línea somática que se dividen por mitosis.

Fuente: Caputo B, Ienco A, Cianci D, Pombi M, Petrarca V, Baseggio A, Devine G, della Torre A (2012) The “Auto-Dissemination” Approach: A Novel Concept to Fight Aedes Albopictus in Urban Areas. PLoS Negl Trop Dis 6(8): e1793. doi: 10.1371/journal.pntd.0001793. Labbé  GMC, Nimmo DD, Alphey L (2010) piggybac- and PhiC31-Mediated Genetic Transformation of the Asian Tiger Mosquito, Aedes albopictus (Skuse) PLos Negl Trop Dis 4(8): e788. doi: 10.1371/journal.pntd.0000788.

Simmons Rosalía (2011) El Aedes albopictus habita en el área metropolitana, Periódico La Prensa, Consultado el: 27 de septiembre de 2012, disponible en: http://www.prensa.com/uhora/el-%E2%80%98aedes-albopictus%E2%80%99-habita-en-el-area-metropolitana/31190

System Biosciences (SBI) The PiggyBac Transposon System, Consultado el: 24 de enero de 2013, disponible: http://www.systembio.com/piggybac

Sinceros deseos de pronta mejoría a la presentadora de la Última Hora, Carmen Sousa

Este año muchos televidentes del programa la Última Hora, hemos estado al tanto del estado de salud de una de las presentadoras más queridas de Panamá, Carmen Julia Sousa. Muchos han leído en reseñas de periódicos sobre el Síndrome Doloroso Regional Complejo que padece actualmente Carmencita. Pero… ¿realmente conoces las implicaciones de este padecimiento? No puedo negar que para mí es desconocido el perfil clínico de una persona que padece SDRC y me gustaría compartir con ustedes los artículos revisados que hablan sobre este síndrome.

Empecemos con sus causas. El Síndrome Doloroso Regional Complejo (SDRC) de tipo I es causado por traumatismos de diverso grado como: contusiones, abrasiones, esguinces, heridas y fracturas o patologías no traumáticas (infarto de miocardio, lesiones cerebrovasculares contralaterales). El SDRC tipo I se caracteriza por los síntomas sensitivos y autonómicos, alteraciones motoras y en ocasiones síntomas inflamatorios.

Este síndrome se define también como un desorden o grupo de desórdenes que pueden desarrollarse como consecuencia de un trauma, con o sin una lesión nerviosa obvia. Se describe frecuentemente la existencia de dolor espontáneo, alodinia o hiperalgesia. En este último caso el dolor es desproporcionado respecto al factor que lo ha estimulado. La región dolorida presenta en algún momento cambios del flujo sanguíneo de la piel, actividad sudorípara anormal o edema.

El dolor se asocia a los cambios generados por el sistema nervioso autónomo. Las neuronas espinales pueden  aumentar su sensibilidad por los cambios anatómicos. A nivel supraespinal se observa reorganización de la corteza somatosensorial.

En la mayoría de los casos estos síntomas y signos se localizan en una extremidad que ha sufrido un traumatismo y durante su evolución tiende a progresar hacia el extremo distal de la extremidad sin seguir ningún patrón de distribución nerviosa periférica. En el pasado el SDRC tipo I ha recibido numerosos nombres y en particular el término de “causalgia menor” haciendo referencia a su similitud con la causalgia severa que es propia de la lesión de nervios, en  tanto que en el SDRC tipo II no se detecta lesión nerviosa periférica.

Se consideran otras formas clínicas del SDRC tipo I, el síndrome seudoangioneurótico, en el que predomina el edema y la atrofia ósea, el síndrome hombro-mano de Steinbrocker, con dolor y rigidez principalmente en el hombro y el síndrome de Sudeck con alteraciones vasculares en las partes acras de las extremidades.

En la actualidad el sídrome doloroso regional complejo (SDRC) de tipo II incluye principalmente a la causalgia. En la causalgia las alteraciones descritas no se limitan al territorio de distribución del nervio lesionado si no que lo rebasan y alcanzan una distribución distal generalizada.

Existe un subgrupo de neuropatías post-traumáticas que no cumple los requisitos clínicos para ser consideradas causalgias ya que los pacientes presentan hormigueo y dolor urente, limitados al territorio inervado por el nervio lesionado y sin tendencia a la disfunción. Estas neuropatías post-traumáticas localizadas no tienen los mismos mecanismos fisiopatológicos que la causalgia, aunque por ser secundarias a una lesión  nerviosa si son incluidas en el SDRC tipo II.

Síndrome Doloroso Regional Complejo

Las personas que sufre de SDRC pueden presentar las siguientes alteraciones:

  • Sensitivas:Estas alteraciones incluyen dolor y otros síntomas sensitivos. El dolor que sufren estos pacientes es de varios tipos:
    • Espontáneo:  desencadenado por diversos estímulos, puede ser urente, pulsátil, opresivo o punzante y con frecuencia se siente en la profundidad de la porción distal de la extremidad afectada. El dolor disminuye al elevar la extremidad y aumenta cuando desciende lo que sugiere un componente ortostático. Ambos estímulos causan hiperalgesia e hiperpatía:
      *La hiperalgesia: mecánica o térmica es la respuesta dolorosa amplificada.
      *La hiperpatía: es la sensación dolorosa prolongada tras el estímulo.
      La hiperalgesia y la hiperpatía presentan una distribución espacial difusa que no se corresponde con ninguno de los territorios de distribución nerviosa ni con la localización de la lesión precedente
    • Paroxístico: Los paroxismos de dolor son espontáneos y cuya intensidad causa quebranto. A esta gran variedad de síntomas dolorosos se puede asociar algún tipo de déficit somatosensitivo.
  • Disfunción del sistema autonómico: Los síntomas y signos de disfunción autonómica son secundarios a la actividad sudorípara anormal, los cambios del flujo sanguíneo de la piel y el edema. La coloración de la piel es variable, puede ser roja, azulada y pálida, en ocasiones moteada y su temperatura suele ser superior o inferior respecto de la región contralateral. La diferencia media de la temperatura de la piel entre la región afectada y la contralateral es aproximadamente de 3.5°C.
  • Disfunciones motoras: La disminución de fuerza de la extremidad con SDRC lleva a todos los músculos distales

Establecer el diagnóstico es complicado actualmente, dada la variedad del cuadro de esta patología, la inhibición simpática con fentolamina es la prueba más aceptada para diagnosticar un dolor de mantenimiento simpático.  Incluso algunas formas de diagnóstico y tratamiento pueden causar más discapacidad y disfunción. El principal objetivo de los pacientes con el SDRC, es disminuir el dolor, aumentar la función y permitir el restablecimiento de las actividades diarias del paciente. Aunque algunos tipos de tratamientos pueden ser efectivos, estos objetivos son mejor alcanzados a través de una cuidadosa selección de medicamentos, con técnicas psicológicas y de comportamiento, y rehabilitación física limitando procedimientos invasivos.

La idea centra en el manejo del SDRC es restaurar el miembro afectado. Los pacientes de SDRC tienen un perfil heterógeno a nivel psicológico y médico que los pacientes con neuropatía dolorosa diabética y neuralgia postherpética. Este síndrome es ampliamente estudiado en ensayos farmacológicos para tratar el dolor entre algunas drogas que pueden ser empleadas para tratar el SDRC son:

  • Drogas antiepilépticas: Gabapentin es una de las más prescibidas  en medicación contra el dolor neuropático en general, y específicamente en SDRC. Este tipo de medicación ha sido recientemente reportada para el tratamiento de SDRC. El mecanismo por el cual trabaja Gabapentin se cree que puede ser en la modulación de los canales de calcio a la subunidad alfa – 2 – beta. La droga ha sido estudiada extensivamente en neuropatía dolorosa diabética y neuralgia post herpética con una eficacia demostrada. Este medicamente ha demostrado una reducción significativa del dolor, comparado con los placebos.
    La mayoría de los ensayos clínicos emplean diseños con monoterapias para investigar su eficacia. Recientemente Gilron y colaboradores  investigaron el Gabapentin, la morfina y su combinación contra el dolor neuropático. El autor encontró que se obtiene mejor analgesia con bajas dosis de cada droga combinada que con las drogas usadas por separado.
  • Antidepresivos: Existe una amplia evidencia científica que apoya que el uso de antidepresivos tricíclicos (TCAs) en el dolor neuropático. Los efectos antihiperalgésicos de los TCAs esta probablemente relacionado con el aumento de las vías inhibitorias descendentes noradrenérgicas y serotonérgicas, y el bloqueo parcial de los canales de sodio. Estos mecanismos son independientes de sus efectos antidepresivos. Los TCA no son drogas benignas y una sobredosis intencional, puede ser tóxica comparado con los antidepresivos  selectivos de serotonina. Aunque existe literatura que apoye el uso de TCA en una variedad de condiciones de dolor neuropático, solo existe evidencia empírica que respalde su uso en SDRC.
  • Opioides: Es una opción controversial para el tratamiento del dolor crónico de origen no cancerígeno, y es particularmente cierto en el SDRC. Existe la creencia generalizada que son menos efectivos en dolor crónico neuropático respecto a su uso en estados de dolor nociceptivo agudo y subagudo. Aunque existe buena data que demuestra que los opioides pueden reducir en dolor y mejorar la calidad de vida en pacientes con dolor neuropático. Se debe resaltar que no hay estudios bien cotrolados que demuestren mejoras a largo plazo en dolor neuropático tratado con opioides. El dilema con el  tratamiento a largo plazo en SDRC es que el uso prolongado de opioides puede resultar en un problema que incluya tolerancia, hiperalgesia, efectos hormonales y la supresión del sistema inmune. A pesar de que puede prescribirse el tratamiento con opioides para reducir el dolor y mejorar la función, el tratamiento puede producir más dolor y disfunción en algunos pacientes.
  • Drogas anti-inflamatorias: son comúnmente usadas para tratar símtomas inflamatorias y el dolor que acompaña al SDRC. Estos medicamentos actúan inhibiendo las ciclooxigenasas y previniendo la síntesis de prostaglandinas, las cuales median la inflamación y la hiperalgesia. No existen estudios consistentes que confirmen la efectividad de los anti-inflamatorios en el dolor neuropático o SDRC. Con el reconocimiento del rol de la ciclooxigenasa espinal y sus efectos en la hiperalgesia, ahi un interés renovado en el estudio de una clase más vieja de medicamentos al igual que las Cox-2 selectivas. Corticosteroides sistémicos han mostrado ser útiles en el tratamiento de SDRC en estudios abiertos. Kingery concluyó que un corto ensayo con corticosteroides dan un buen soporte a los estudios. Aunque un uso prolongado de corticosteroides tienen un cuestionable factor de riesgo – beneficio y un sin número de contraindicaciones. Un posible mecanismo es la inducción de una respuesta inflamatoria exagerada en el tejido lastimado que es mediado por el exceso de radicales de oxígeno.

Fuente:

Paola Díaz-Zuluaga, Ricardo Plancarte-Sánchez, Antonio César Tamayo-Valenzuela (2004) Síndrome doloroso regional complejo, Estado actual, Cir Ciruj 2004; 72:225-239.

Petra Meier, David Zurakowski, Charles Berde, Navil Sethna (2010) Lumbar Sympathetic Blockade in Children with Complex Regional Pain Syndromes: A Double Blind Placebo-controlled Cossover Trial, Anesthesiology. Author manuscript; available in PMC 2010 August 1. Published in final edited form as: Anesthesiology. 2009 August; 111(2): 372-380. doi: 10.1097/ALN.0b013e3181aaea90 PMCID: PMC2724014

Mackey S, Feinberg S (2007) Pharmacologic Therapies for Complex Regional Pain Syndrome, Curr Pain Headache Rep. Author manuscript; available in PMC 2010 August 3. Published in final edited form as: Curr Pain  Headache Rep.2007 February; 11(1): 38-43.

 

Revista –  En la portada aparece una niña afectada en el Incidente de Seveso con evidencia de Cloroacné

Esta investigación se inicia con la pregunta ¿Conoces algo de los furanos?…pensé quizás pueda revisar algún libro de química orgánica para conocer sus generalidades. Mi lectura comenzó muy bien con el primer libro luego al intentar con el segundo llegó una inevitable confusión, en especial cuando empecé a analizar lecturas con otros enfoques.

La causa primaria de la confusión es el empleo del término furano que es un anillo heterocíclico para generalizar sobre una serie de compuestos con propiedades totalmente diferente. A continuación les presento los resultados de mi lectura.

Los Policlorodibenzofuranos, genéricamente llamados furanos, son sustancias químicas no generadas de manera comercial ni de forma intencional, se consideran altamente tóxicos y potencialmente cancerígeno…¿Qué importancia tiene para nosotros una sustancia producida de forma secundaria en una variedad de procesos industriales y de combustión?.

Para entender porqué nos remontamos al año de 1976, en Italia, donde sucedió el incidente de Seveso, en este incidente se liberaron al ambiente 1-5kg de tetraclorodibenzodioxinas proveniente del sobrecalentamiento del proceso de síntesis del herbicida: ácido 1,2,5-triclorofenoxiacético. En la población afectada se pudo observar los siguientes síntomas:

  • Cloroacné
  • Disfunciones del sistema nervioso
  • Dolores en músculos y articulaciones
  • Desórdenes psicológicos

Además hubo una elevada mortandad de animales domésticos. La dioxinas son muy similares a los furanos en su estructura, propiedades físico-químicas ( las dioxinas difieren en que no poseen uno de los átomos de oxígeno del anillo central). Básicamente es un sólido cristalino de color blanco con puntos de fusión y ebullición elevados. También tiene una elevada estabilidad térmica (razón por la cual son muy difíciles de destruir en procesos de combustión). Estos compuestos se caracterizan por su lipofilia, que favorece su acumulación en los tejidos grasos del organismo de los seres vivos y lo hace soluble en la mayoría de los disolventes orgánicos.

Esta sustancia se encuentran ampliamente distribuidas en el ambiente en concentraciones muy bajas. Se generan a temperaturas por encima de los 200°C durante la combustión incompleta de compuestos clorados. También han estado presentes en el ambiente a nivel de traza debido a incendios y a la caída de relámpagos. Estas se producen como resultado de reacciones secundarias en la fabricación de compuestos aromáticos halogenados, principalmente donde se utiliza cloro.

Se ha demostrado que las dioxinas y furanos se producen en los precipitadores electrostáticos y en una gama amplia de procesos metalúrgicos en los que se alcanzan temperaturas elevadas. El uso de compuestos clorados en los procesos de fabricación de hierro y acero y el uso de metales provecientes de chatarras contaminados con aceites y plásticos que contienen cloro, propician la formación de furanos.

Los PCB’s (policlorobifenilo) y PCT’s (policloroterfenil) son sustancias con dos ciclos bencénicos y dos de cloro. Son muy poco solubles en agua y no son inflamables disponiendo de buenas propiedades dieléctricas. Para la formación de furanos es necesario que la reacción sea catalizada por la presencia de ceniza volantes y metales (Fe, Cu, Al etc.). Los PCB’s se utilizaban como refrigerante en los transformadores eléctricos y actualmente su uso está prohibido.

Dibenzofurano

Todos los congéneres de los dibenzofuranos clorados son planos, es decir todos los átomos de C, O, H y Cl se encuentran en el mismo plano. Se forman a partir de los PCBs por eliminación de los átomos X e Y pueden ser cloro los dos, o bien uno puede ser hidrógeno y el otro cloro, de manera que la molécula que se elimina en Cl2 o HCl respectivamente. La mayor parte del cloro en la molécula original de PCB está aún presente en el dibenzofurano, dando lugar a los dibenzofuranos policlorado más comúnmente denominados por PCDFs. Hay 135 congéneres de dibenzofuranos, ya que la simetría del sistema de anillos es menor para los furanos.

Casi todas las muestras comerciales de PCB están contaminadas con algo de PCDFs, si bien usualmente solo alcanza unos pocos ppm en los líquidos originales producidos. Si los PCB se calientan a elevadas temperaturas y está presente algo de oxígeno, la conversión de PCBs a PCDFs hace aumentar el nivel de contaminación varios órdenes de magnitud. La concentración de furano en fluidos refrigerantes de PCB es mayor que en los materiales vírgenes, probablemente por el calentamiento moderado que sufre durante su operación normal. La producción de furano también ocurre si se intentan quemar PCBs con llama a temperaturas no demasiado altas.

El furano

Tenemos también el “otro furano”  que hace referencia al anillo furánico básico, su química es muy diferente a los dibenzofuranos. Son compuestos heterocíclicos que contiene un anillo formado por más de un tipo de átomo. El furano es uno de los compuestos heterocíclicos más simples que tiene un heteroátomo.

En este tipo de heterocíclico generalmente se dan reacciones de sustitución electrofílica: nitración, sulfonación, halogenación, acilación de Friedel -Craft. Los calores de combustión indican estabilización por resonancia entre 22 y 28 kcal/mol: algo inferior a la energía por resonancia del benceno (36 kcal/mol), pero mucho más alta que la mayoría de los dienos cojugados.

Su temperatura de ebullición es 31°C, el furano debe tener y tiene propiedades químicas intermedias entre las de un sistema aromático altamente deslocalizado como el benceno y las de un dieno cíclico sencillo que sea también un éter de enol.

Por estas propiedades se considera al furano como aromático, pero es evidente que esta estructura no representa la de los compuestos aromáticos. El método más general de obtención de furanos sustituidos consiste en la deshidratación de una dicetona 1,4 por medio de un reactivo ácido como el H2S04 o el P2O5.

El derivado furánico más  corriente y más barato es como mucho el furano 2-carboaldehído, conocido comúnmente como furfural. La forma fácil de preparar furano es por descarbonilación (eliminación de monóxido de carbono) de furfural (furfuraldehído), que a su vez se obtiene por tratamiento de cáscaras de avena, arroz o mazorcas de maíz, con ácido clorhídrico hirviendo. En esta reacción se hidrolizan pentosanos a pentosas que se deshidratan y ciclan para formar furfural.

Al final puedo concluir categóricamente que es un error emplear el término furano de forma tan general. Agradecería si me compartieran su opinión o sustenten porque existe esta ambigüedad respecto a ambos compuestos. Respecto a la parte medioambiental, estos incidentes marcaron de forma clave la historia sobre el control de compuestos químicos que puedan ser liberados al ambiente  como las dioxinas y furanos. Espero les sea útil y les ayude a conocer un poco de estos compuestos.

Fuente:

Allinger Norman (1984) Capítulo 28: Heterociclos Aromáticos y los Compuestos Naturales que los contienen, Química Orgánica, 2da. Edición, Ed. Reverté., Barcelona: España.

Baird Colin (2001) Capítulo 6,  Química Ambiental, 2da Edición, Ed. Reverté S.A. pag 352-353, Barcelona, España

Castells Xavier Elias (2005) Tratamiento y valorización energética de residuos, Ediciones Díaz de Santos, España.

Gavilán A, Castro Díaz J Capítulo 3 Dioxinas, Furanos y Hexaclorobenceno, Las sustancias tóxicas persistentes, Secretaría del Medio Ambiente y Recursos Naturales, Instituto Nacional de Ecología, México.

Garfias Javier, Ayala Luis, Residuos peligrosos en México, Instituto Nacional de Ecología, México

Morrison R, Boyd R (1998) Capítulo 35: Compuestos Heterocílcios, Química Orgánica, 5ta Ed. Editorial: Pearson Addison Wesley., México.

Equipo de iGEM 2012 – Copyright: MARISSA GIOVANI

Usualmente no escribo de asuntos personales, pero sí sobre temas que en algún momento del día me produjeron curiosidad. En esta ocasión les quiero compartir mi experiencia dentro de el proyecto desarrollado por estudiantes universitarios en Panamá  para la competencia Internacional de Maquinas de Ingeniería Genética (iGEM). Panamá lleva tres años consecutivos participando en esta competencia y… bueno antes de continuar…ya me imagino que se preguntarán ¿Qué es iGEM?

La Fundación Internacional de Maquinas de Ingeniería Genética, es una organización sin fines de lucro que se dedica a promover  la educación y la investigación científica en el área de biología sintética. La sede es en Cambridge, Massachusetts, Estados Unidos. Desde el año 2010 se realiza la Competencia iGEM, donde participan estudiantes universitarios de carreras científicas.

La fundación también establece y opera un Registro de Partes Biológicas Estándar, es decir una colección de componentes biológicos suministrados por los estudiantes que  forman parte de la competencia. El desarrollo del proyecto se realizan en universidades, laboratorios, Institutos de Investigación e industria.

Foto del perfil para el wikipage – Copyright: MARISSA GIOVANI

Entrando ya en materia ¿En qué consiste la competencia? Básicamente se forma un equipo de estudiantes de licenciatura a los cuales se les provee un kit de partes biológicas del Registro de Partes Biológicas Estándar. El equipo usa estas partes y las nuevas de su propio diseño para crear un sistema biológico y así operarlas en una célula viva.

El diseño de este proyecto y el formato de la competencia es excepcionalmente motivante y una forma de enseñanza efectiva. En el 2011 iGEM se expande para incluir la división para estudiantes de secundaria y una división de emprendedores en el 2012

Aunque soy Biotecnóloga de profesión, trabajé la programación y diseño del “wikipage” del equipo de este año en 3 meses…( todavía recuerdo cuando cursaba computo en secundaria y dejaba que mi compañera de grupo, apasionada por la informática, programara todas las tareas asignadas de Visual Basic).

Tengo un año trabajando en este blog, armando revisiones de literatura en temas de salud pública en general… además en algunas ocasiones cuando era niña apoyé a mi padre cuando había que desarmar la computadora o usar algún  método nada tradicional para eliminar algún “troyan”. Aunque no me es indiferente la tecnología  mis nociones de programación son pobres.

Inicialmente cuando me invitaron a colaborar con el equipo de este año, lo primero que pensé es que encontraría alguna plataforma para ingresar la data como lo hago en este blog. Cuando inicié mi tarea prontamente  me di cuenta que la plataforma de trabajo no era para nada “user friendly” y que había que trabajar con códigos de html.

Bueno más que entrar en pánico, procedí a ejecutar mi plan A: bajar un manual de html. Invertí como dos semanas en este plan y no funcionó porque no tenía tiempo para estudiarme toda la historia del html y cada vez que editaba los códigos no conseguía la apariencia que deseaba para la página.

Recordé que la programación para este blog es “CSS” y así fue como empecé a ejecutar mi plan B. Este trabajo no se hubiera acelerado de la forma en que se dio, sin el programa “Web Page Maker” (facilitado por un colega) en el pude trabajar el diseño. Como les comenté anteriormente mi conocimiento es básico, así que comencé a trabajar con una plantilla y así se publicó la primera propuesta de diseño para el wikipage.

Plantilla inicial para el wikipage

Esta publicación significó copiar y editar línea por línea de los códigos arreglar los links de las imágenes y revisar todo lo que no funcionara. Como era una plantilla tenía problemas para ingresar la data porque me limitaba el espacio. En vista de todas estas complicaciones me vi en la necesidad de recurrir al Plan C.

El Plan C, consistía en diseñar de “cero” un modelo para el wikipage. Esta etapa consumió la mayor parte del tiempo y energía porque aquí no bastó con editar los códigos si no que además tuve que analizar algunos problemas del diseño con la plantilla de la página del wikipage que tenía por “default”: por ejemplo la imágen que tienen de “header” inicialmente no la podía eliminar.

Y como soy fiel creyente de las leyes de Murphy en el camino comenzaron a surgir nuevos inconvenientes entre ellos: arreglar el fondo, los márgenes, entender como poner un menú estético, hacer que los “links” funcionaran y el mayor de los dramas para mí fue el “Slideshow” de fotos y los arreglos a horas del “deadline”.

Un vistazo de los códigos ingresados para crear el wikipage.

El proyecto desarrollado fue: “Genetically Modified E. coli as an Alternative Biosensor of Cyanide and Cyanide Compound”.

Ellos deseaban incorporar genes que permitiera a la bacteria convertirse en un biosensor con la capacidad de detectar la presencia de cianuro y compuestos cianurados; por la expresión del gen reportero (RFP) bajo el control del promotor inducible por estos compuestos. Este gen proviene de la bacteria Pseudomona pseudoalcaligenes. Esta técnica podría ser usada para detectar contaminación en agua y tierra. También se puede volver una plataforma donde no solo incorpore el gen que permita a la bacteria detectar el cianuro si no que también lo degrade usando un método accesible y amigable con el ambiente.

Estos tres meses para mí fue de gran aprendizaje, tanto en el trabajo con el wikipage como con las ocasiones en que pude asistir en los laboratorios, no puedo más que agradecerles a los chicos que me confiaran este trabajo. Si quieren conocer la página y el trabajo realizado por el quipo de iGEM puedes visitar este link: http://2012.igem.org/PROJECT.html

Espécimen en exhibición en El Valle Conservation Amphibian Center (EVACC), Foto: Lizzi M. Herrera 2010

¿Conoces a la rana de la especie Atelopus zeteki? es común ver su imagen en los mercados de artesanías, ojalá fuera tan común verla en estado silvestre…  Este anfibio mejor  conocido como la rana dorada era habitual en regiones específicas de Panamá, su población ha disminuido en comparación con las observaciones realizadas en 1980. Es muy rara y casi extinta en Cerro Campana y está reportada como extinta en el Valle de Antón desde hace 40 años (Karen Lips et al, 2010).

La llegada del hongo Batrachochytridium dendrobatidis ha afectado severamente a las poblaciones de anfibios del área neotrópical de Panamá. Desde el 2004 la poblaciones de anfibios de El Copé colapsaron, desapareciendo en cuestión de meses (K. Lips et al 2010). La chytridiomycosis es una epidemia que se esta esparciendo desde el oeste al este de Panamá, las poblaciones en el este están en severo riesgo de desaparecer.

Diversas universidades en Estados Unidos están  invirtiendo tiempo y recursos en investigaciones, para controlar el hongo quítrido y en la conservación de las especies que han sido diezmadas por esta epizootia global. En este reporte quiero hacer alusión  a dos líneas de investigación, que tienen un enfoque práctico y que pudieran ser parte de la solución de este problema; que esta reduciendo de forma drástica las poblaciones de anfibios.

El primero de estos estudios se realiza en la Universidad Estatal de Oregon, en Estados Unidos, desde hace varios años han tratado de controlar y tratar la chytridiomicosis in vitro, incluyendo tratamientos con compuestos anti-fúngicos y la suplementación de microbios cutáneo (bioaugmentation).

En esta investigación, se descubrió que una especie de zooplancton es capaz de consumir al hongo responsable de la devastación en las poblaciones de anfibios en diversos puntos del planeta. El organismo en estudio es la Daphnia magna, quien tiene el potencial de ser una herramienta para el control biológico del hongo (Julia Buck et al, 2011)

En el estadio infectivo, el Batrachochytrium es una zoospora flagelada de vida libre acuática, de 3 – 5μm de diámetro. Este diámetro está dentro del intervalo de tamaño de presas preferidas de cladóceros como la Daphnia spp. La Daphnia  es abundante en ambientes lénticos a nivel mundial, son filtradores selectivos, que consumen algas nanoplactónicas, bacterias, hongos, protozoarios y dedritos de un tamaño de 1 – 100μm (Julia Buck et al, 2011).

Los experimentos in vitro demostraron que, la D. magna es capaz de consumir zoosporas de Batrachochytrium y respalda el potencial de los controles biológicos para controlar al Bd. Los resultados de este estudio deben ser evaluados en sistemas naturales para una mejor compresión de como el Batrachochytrium puede ser controlado por el zooplancton.

Daphnia magna, hembra adulta – Foto por Hajime Watanabe, Creative Commons, Public Library of Science

Otros posibles biocontroladores de Bd podrían ser otras especies de zooplancton, copepodos (Copepoda)  y larvas de camarón (Ostracoda). Basados en estas observaciones los zooplancton podrían ser reguladores ecológicos de las poblaciones de Bd, reduciendo el riesgo de infección de los anfibios en ambientes acuáticos. Los copepodos han sido modelos exitosos como control biológico en otros sistemas, por ejemplo, aplicaciones de Mesocyclops han reducido las poblaciones de larvas de mosquito, eliminando de esta forma el vector del Dengue Hemorrágico y reduciendo la incidencia de la enfermedad (D. Woodhams et al, 2011).

La segunda investigación es llevada a cabo por el Smithsonian Conservation Biology Institute (SCBI) en Washington DC; quienes han empezado a colectar muestras de esperma de la especie Atelopus zeteki,  que es parte de la colección del zoológico.

Aunque los investigadores han colectado muestras de espermas de otras especies de anfibios como la rana gopher de Misssissippi y la rana leopardo, no existe aún publicaciones que detallen la metodología de colección de esperma en la rana dorada.  Los  colegas del zoológico de Maryland han colaborado en el proceso, dando asesoramiento a los investigadores del SCBI sobre la metodología para colectar espermatozoides de la rana, utilizando estimulación hormonal.

El congelamiento del esperma, podría ser un modelo para asegurar a largo plazo la integridad genética de otras especies en situaciones similares. Gina Della Togna es una estudiantes de  PhD panameña del SCBI, está a cargo del procedimiento de colección de esperma. Aunque esto es una técnica relativamente novedosa, Della Togna expresa que siente que es comparable a la colecta de esperma de mamíferos. Después de la estimulación hormonal, los espermatozoides son excretados por la cloaca de la rana. En contraste con los mamíferos que poseen estructuras especializadas para la reproducción y desechos.

Aunque la colección de esperma de estas especies ha sido exitosa, encontrar el protocolo más eficiente, reproducible de estimulación es crítica; la identificación del criopreservante y método de congelamiento correcto puede ser otro desafío.  Los investigadores sospechan que el componente celular responsable del movimiento del esperma, llamado vesícula mitocondrial, tiene una estructura única comparada con la de otros animales.

La rana dorada tiene un gran valor cultural, fue elemento de orfebrería de las antiguas poblaciones precolombinas y hoy día es parte de la nacionalidad de todos los panameños. Todo esto son valores agregados para el trabajo que conlleva preservar el material genético de esta especie que es endémica en la región.

Información sobre: El Festival de la Rana Dorada

Como parte de los trabajos de comunicación y concientización sobre el estado actual esta especie se está realizando el Festival de la Rana Dorada del 10 – 19 de agosto, en marco de la celebración del día de la Rana Dorada el 14 de agosto. Les exhorto a participar en el foro público: “El impacto cultural y el estado de conservación de la Rana Dorada y otros anfibios de Panamá”.

Glosario:

  • Ambientes lénticos: Son cuerpos de agua cerrados que permanecen en un mismo lugar sin correr ni fluir, como lagos, las lagunas, los esteros o los pantanos. Comprenden todas las aguas interiores que no presentan corrriente continua; es decir, aguas estancadas sin ningún flujo de corriente.
  • Bioaugmentation: Es la introducción de un grupo de cepas microbianas o una variedad genéticamente modificada para tratar aguas o suelos.

Fuentes:

  • Buck JC, Truong L, Blaustein AR (2011) Predation by zooplankton on Batachochytrium dendrobatidis: Biological control of the deadly amphibian, Oregon State University.
  • Jaseph P (2012) National Zoo Successfully Collects Sperm Samples to Save Endagered Frog, Amphibian Rescue and Conservation Project, consultado el: 5 de agosto de 2012, disponible en: http://amphibianrescue.org/2012/02/09/national-zoo-successfully-collects-sperm-samples-to-save-endangered-frog/
  • Woodhams D, Bosch J, Briggs C, Cashins S, Davis L, Lauer A, Muths E, Puschendorf R, Schmidt B, Sheafor B, Voyles J (2011) Mitigating amphibian disease: strategies to maintain wild populations and control chytridiomycosis, Front Zool. 2011; 8:8. Published online 2011 April 18. dpi: 10.1186/1742-9994-8-8.

Análisis de muestras de leche para medir parámetros físico-químicos y microbiológicos.

La industria… cada vez más competitiva, es casi un cliché leer la importancia que tiene conocer el famoso Sistema de Análisis de Riesgos y de Control de Puntos Críticos mejor conocido como HACCP.  Este sistema fue adoptado por la Comisión del Codex Alimentarius (CCA) y es importante para las empresas de productos de consumo masivo porque permite identificar peligros específicos y medidas para su control. Con este instrumento se puede evaluar los peligros y establecer sistemas de control que se centran en la prevención.

Este sistema es muy variable de una industria a otra por el tipo de producción. El HACCP se puede aplicar desde el productor primario hasta el consumidor final y su aplicación deberá basarse en pruebas científicas de peligros para la salud humana, además de mejorar la inocuidad de los alimentos. Algunas ventajas que ofrece la aplicación del sistema HACCP son:

  • Facilitar la inspección por parte de las autoridades de reglamentación.
  • Promover el comercio  internacional.
  • Aumentar la confianza en la inocuidad de los alimentos.

Sin embargo el éxito de este sistema depende de muchos factores como:

  • El compromiso y la participación tanto de la dirección como del personal.
  • Se requiere de un enfoque multidisciplinario, donde se incluya a agrónomos, veterinarios, personal de producción, microbiólogos, especialistas en medicina y salud pública, tecnólogos de alimentos, expertos en salud ambiental, químicos e ingenieros según el área.

Este sistema es compatible con la implementación de sistemas de gestión de calidad, en el caso de tratarse de la inocuidad de alimentos se suele emplear la serie ISO 9000 (Familia de estándares que representan el consenso internacional de las buenas prácticas de calidad). La familia ISO 9000 abordan varios aspectos de la gestión de calidad y contiene algunos de los estándares más conocidos de las ISO. Los estándares proveen una guía y herramientas para compañías y organizaciones que quieren asegurar que sus productos y servicios complazcan las necesidades del cliente, y que la calidad es mejorada constantemente.

Existen varios estándares en la familia ISO 9000, como por ejemplo:

  • ISO 9001:2008 –  Establece los requisitos de un sistema de gestión de calidad.
  • ISO 9000:2005 – Cubre los conceptos básicos y el lenguaje.
  • ISO 9004: 2009 –  Se centra en como hacer la gestión de calidad más eficiente y efectiva.
  • ISO 19011 – Establece orientaciones sobre las auditorías internas y externas de los sistemas de gestión de calidad.

Los estándares se basan en un número de principios de gestión de calidad, que  incluye una fuerte orientación a las necesidades del cliente, la motivación y participación de una alta dirección, el enfoque basado en procesos y en la mejora continua. Emplear las ISO 9001:2008 ayuda a asegurar que el cliente obtiene de forma consistente, una buena calidad en productos y servicios, los cuales se tornan en muchos beneficios para la empresa.

Los Principios del HACCP

Al momento de aplicar el sistema de HACCP a cualquier sector de la cadena alimentaria, éste deberá estar funcionando con los Principios Generales de Higiene de los Alimentos del Codex. Cuando se identifiquen y analicen los peligros y se efectúen las operaciones consecuentes para elaborar y aplicar sistemas de HACCP, deberán tenerse en cuenta las repercusiones de las materias primas, los ingredientes, las prácticas de fabricación de alimentos, la función de los procesos de fabricación en el control de los peligros, el probable uso final del producto, las categorías de consumidores afectados y las pruebas epidemiológicas relativas a la inocuidad de los alimentos.

La finalidad del sistema de HACCP es lograr que el control se centre en los PCC. En el caso de que se identifique un peligro que debe controlarse pero no se encuentre ningún PCC, deberá considerarse la posibilidad de formular de nuevo la operación. El sistema de HACCP deberá aplicarse por separado a cada operación concreta.

Cuando se introduzca alguna modificación en el producto, el proceso o en cualquier fase, será necesario examinar la aplicación del sistema de HACCP y realizar los cambios oportunos. Es importante que el sistema de HACCP se aplique de modo flexible, teniendo en cuenta el carácter y la tipo de operación.

Algunas operaciones útiles a la hora de aplicar un sistema de HACCP son:

  • Formación de un equipo de HACCP: La empresa deberá asegurar que se disponga de un personal con conocimientos y competencia específicos para los productos que permitan formular un plan de HACCP eficaz.
  • Descripción del producto: Deberá formularse una descripción completa del producto que incluya información  pertinente sobre su inocuidad (composición, estructura física/química como: Aw, pH, etc.), tratamientos estáticos para la destrucción de los microbios (tratamiento térmico, congelación, salmuera, ahumado etc.), envasado, durabilidad, condiciones de almacenamiento y sistema de distribución.
  •  Determinación del uso al que ha de destinarse: Se deberá basar en los usos previstos del producto por parte del usuario o consumidor final.
  • Elaboración de un diagrama de flujo: Éste deberá ser elaborado por el equipo del HACCP y cubrir todas las fases de la operación.
  • Confirmación in situ del diagrama de flujo: El equipo de HACCP deberá cotejar el diagrama de flujo con la operación de elaboración en todas sus etapas.
  • Enumeración de todos los posibles riesgos relacionados con cada fase:la producción primaria, la elaboración , la fabricación y la distribución hasta el punto de consumo debe tomarse en cuenta  a la hora de enumerar todos los peligros que puedan razonablemente preverse. El equipo de HACCP llevará a cabo un análisis de los peligros para identificar, cuáles son los peligros cuya eliminación o reducción a niveles aceptables resultan indispensables por su naturaleza, para producir un alimento inocuo. Al realizar estos análisis, es importante incluir los siguientes factores:
    • La probabilidad de que surjan peligros y la gravedad de sus efectos para la salud (la supervivencia o proliferación de microorganismos involucrados, la producción o persistencia de toxinas, sustancias químicas o agentes físicos en los alimentos).
  • Determinación de los puntos críticos de control:  La determinación de un PCC en el sistema de HACCP se puede facilitar con la aplicación de un árbol de decisiones, en el que se indique un enfoque de razonamiento lógico. El árbol de decisiones deberá aplicarse de manera flexible,  considerando si la operación se refiere a la producción, el sacrificio, la elaboración, almacenamiento, la distribución u otro fin y deberá  utilizarse con como orientación en la determinación de los PCC.
    El árbol de decisiones puede no ser aplicable a todas las situaciones, por lo cual, podrán utilizarse otros enfoques. Si se identifica un peligro en una fase en la que el control es necesario para mantener la inocuidad y no existe ninguna medida de control que pueda adoptarse en esa fase o en cualquier otra, el producto o el proceso deberá modificarse en esa fase, o en cualquier fase anterior o posterior, para incluir una medida de control.
  • Establecimiento de límites críticos para cada PCC: Para cada PCC, deberán existir y validarse  los límites críticos. En determinados casos, para una determinada fase, se elaborará más de un límite crítico. Por ejemplo podemos mencionar: las mediciones de temperatura, tiempo, nivel de humedad, pH, AW, así como parámetros sensoriales como el aspecto y la textura.
  • Establecimiento de un sistema de vigilancia para cada PCC: La vigilancia es la medición u observación programadas de un PCC en relación con sus límites críticos. A través de éste proceso se podrá detectar una pérdida de control en el PCC. Lo ideal es que la vigilancia proporcione esta información a tiempo como para hacer correcciones que permitan asegurar el control del proceso para impedir que se infrinjan los límites críticos. Cuando sea posible, los procesos deberán corregirse cuando los resultados de la vigilancia indiquen una tendencia a la pérdida de control en un PCC, y las correcciones deberán efectuarse antes de que ocurra una desviación. Los datos obtenidos gracias a la vigilancia deberán ser evaluados por una persona designada que tenga los conocimientos y la competencia necesarios para aplicar medidas correctivas, cuando proceda.
  • Establecimiento de medidas correctivas: Deberán formularse medidas correctivas específicas para cada PCC del sistema de HACCP. Estas medidas aseguran que el PCC vuelva a estar a estar controlado. Los procedimientos relativos a las desviaciones y la eliminación de los productos deberán documentadas en los registros de HACCP.
  • Establecimiento de procedimientos de comprobación:Para determinar si el sistema de HACCP funciona eficazmente, podrán utilizarse métodos, procedimientos y ensayos de comprobación y verificación, incluidos el muestreo aleatorio y el análisis. Entre las actividades de comprobación pueden citarse como ejemplo las siguientes:
    • Examen del sistema de HACCP y de sus registros.
    • Examen de las desviaciones y los sistemas de eliminación del producto.
    • Confirmación de que los PCC se mantienen bajo control.
  • Establecimiento de un sistema de documentación y registro: Es fundamental contar con un sistema de registro eficaz y preciso. Deberán documentarse los procedimientos del sistema de HACCP, y el sistema de documentación  y registro deberá ajustarse a la magnitud de la operación en cuestión. Por ejemplo:
    • Análisis de peligros.
    • Determinación de los PCC.
    • Determinación de los límites críticos.
    • Actividad de vigilancia de los PCC (las desviaciones y las medidas correctivas correspondientes)
    • Modificaciones introducidas en el sistema de HACCP.

Hoja de Trabajo de HACCP

 Una de las industrias que puede ilustrar mejor la aplicación del sistema HACCP es la de productos lácteos. Diferentes códigos pueden usarse para desarrollar lineamientos e instrucciones de trabajo operacional. Especialmente en el manejo de sistemas complejos, estos lineamientos e instrucciones de trabajo pueden facilitar la gestión y organización de la granja. Para que sea efectivo, se debe cumplir  siempre estos lineamientos e instrucciones de trabajo por el granjero y trabajadores.

Por ejemplo tenemos el caso de las instrucciones para visitantes dictados por las normas de  Buenas Prácticas de Producción de lácteos (Good Dairy Farm Practice) de una Finca productora de lácteos:

  1. Carros y camiones: Deben utilizar solamente el área de estacionamientos indicados.
  2. Cambiarse las botas y ropas en el área de higiene antes de entrar a la finca. Reporte su llegada por teléfono siguiendo las instrucciones.
  3. Si es necesario hacer contacto con los animales, tome guantes desechables del “stock” en el área de higiene.  Si necesita utensilios, tómelos  del la barrera de higiene, nuca use los suyos.
  4. Después de haber entrado a la finca , el capataz y los trabajadores le dirán los lineamientos de trabajo de la finca y los asuntos que le conciernan. Siempre siga las instrucciones de higiene.
  5. Siga la rutina de trabajo de la finca como se ha indicado por nuestros trabajadores. Use las duchas de desinfección cuando estén disponibles; cambie las botas/ropas y lávese las manos cuando sea indicado.
  6. No hacer contacto innecesario con el ganado, ni con mascotas u otros animales presentes.
  7. Cuando su visita a la finca haya concluido, limpie las botas y colóquelas  juntas con las ropas en el área indicada en la barrera de higiene. Todos los materiales introducidos por usted en la finca es considerado como material contaminado y no podrá salir de la finca (sin importar si ha sido utilizado o no). Lave sus manos rigurosamente antes de salir de la finca.
  8. Registre los productos medicinales usados o entregados en el sistema de registros como se indica en el área de higiene.
  9. Registre su nombre y hora de visita en la bitácora de visitantes en el área de higiene.
  10. Entregue los materiales que deben ser almacenados en el lugar correcto en el área de higiene.

Esto es sólo un ejemplo de cómo debería ser la visita a una finca productora de leche. ¿Realmente en Panamá se cumple a cabalidad aspectos tan sencillos como la visita de personas ajenas al área de producción? Es interesante como todo tipo de empresas se apuran a exigir de sus empleados conocimientos de HACCP y BPM que no son estrictamente seguido por temas de costos por ellos.  Tenemos buenos ejemplos de producción pero también hay industrias con operaciones y procesos muy cuestionables.

 

Glosario:

  • Análisis de peligros: Proceso de recopilación y evaluación de la información sobre los peligros y las condiciones donde se originan éstos. Con este análisis se decide cuales son importantes con la inocuidad de los alimentos.
  • Controlado: Cuando se ha cumplido todos los procedimientos y los criterios marcados.
  • Controlar: Cuando se adoptan todas las medidas necesarias para asegurar y mantener el cumplimiento de los criterios establecidos en el pan HACCP
  • Desviación: situación cuando un límite crítico es incumplido.
  • Diagrama de flujo: Representación de la secuencia de las fases u operaciones llevadas a cabo en la producción o elaboración de un determinado producto alimenticio.
  • Fase: Cualquier punto, procedimiento o etapa de la cadena alimentaria, incluidas las materias primas, desde la producción primaria hasta el consumo final.
  • Límite crítico: Criterio que diferencia la aceptabilidad o inaceptabilidad del proceso en una determinada fase.
  • Medida correctiva: Acción que hay que realizar cuando los resultados de la vigilancia de los puntos de control crítico (PPC) indican una pérdida en el control de proceso.
  • Medida de control: Cualquier medida y actividad que se realiza para prevenir o eliminar un peligro para la inocuidad de los alimentos o para reducirlo a un nivel aceptable.
  • Peligro: Agente biológico, químico o físico presente en el alimento, que pueda causar un efecto adverso a la salud.
  • Plan de HACCP: Documento preparado con los principios del sistema de HACCP, de tal forma que su cumplimiento asegura el control de los peligros que resultan significativos para la inocuidad de los alimentos en el segmento de la cadena alimentaria considerado.
  • Punto de cítico de control (PPC): Fase en la que puede aplicarse un control importante para prevenir o eliminar un peligro relacionado con la inocuidad de los alimentos o para reducirlo a un nivel aceptable.
  • Sistema de HACCP: Sistema que permite identificar, evaluar y controlar peligros significativos para la inocuidad de los alimentos.
  • Transparente: Característica donde un proceso que este explícitamente expresadas, documentadas y accesibles para su revisión.
  • Validación: Constatación de que los elementos del plan de HACCP son efectivos.
  • Verificación: Aplicación de métodos, procedimientos, ensayos y otras evaluaciones, además de la vigilancia, para constatar el cumplimiento del plan HACCP.
  • Vigilar: Llevar a cabo una secuencia planificada de observaciones o mediciones de los parámetros de control para evaluar si un PCC está bajo control.

Fuente:

FAO (1997), Sistema de Análisis de Peligros y de Puntos Críticos de Control (HACCP) y Directrices para su Aplicación, Anexo al CAC(RCP-1 (1969) Rev.3, consultado el: 4 de mayo de 2012, disponible en: http://www.fao.org/docrep/005/y1579s/y1579s03.htm

ISO, ISO 9001:2008, consultado el: 26 de julio de 2012, disponible en: http://www.iso.org/obp/ui/#iso:std:iso:9001:ed-4:v1:en

Noordhuizen J, Cannas da Silva J, Jan – Boersema S, Vieira A (2008) Applying HACCP – based Quality Risk Management on diary farms, Netherlands: Wageningen Academics Publishers.