Las pruebas bioquímicas nos muestran reacciones que son la base de la identificación de los diferentes agentes bacterianos. Para la identificación de las bacterias, el laboratorio de diagnóstico necesita conocer las características físicas y metabólicas de las mismas. Una vez conocidas las características físicas del microorganismo, se analizan sus reacciones metabólicas tales como la producción de enzimas, metabolitos intermedios, oxidación y fermentación entre otras.  A través de los años se han desarrollado pruebas aprovechando estos conocimientos y ya se tiene pruebas estandarizadas que se elaboran a partir de preparados comerciales que son medios de cultivo conteniendo el compuesto sobre el cual las enzimas bacterianas actúan complementado con indicadores que ponen de manifiesto la reacción que se llevó a cabo.

En el laboratorio se llevan a cabo diversos tipos de análisis bioquímicos:

  • Pruebas en Tubo de ensayo: En este caso  requieren patrones de inoculación específicos para los tubos con agar inclinado, con medio sólido horizontal o  con medio semisólidos. En el caso del tubo con agar inclinado, la inoculación se realiza a partir de una colonia aislada tomada de una placa petri. Con el asa se traslada el inoculo a la superficie del medio que se siembra por estrías, a veces es necesario practicar una incisión en la superficie del agar, la cual no debe llegar hasta el fondo.
    La inoculación de algún medio sólido presentado en tubo de ensayo con superficie horizontal, se realiza utilizando un alambre recto. El método de sembrado consiste en inocular por picadura evitando llegar hasta el fondo del medio.
    Los medios semisólidos se emplean para los estudios de movilidad (Medio SIM); se inocula utilizando un alambre recto tratando que la incisión no llegue al fondo del tubo.
    El laboratorio dentro del protocolo de aislamiento de Salmonellaspp. maneja tres pruebas bioquímicas para discriminar entre cepas:

    • Prueba de descarboxilación de la Lisina (LIA): Esta prueba mide la capacidad enzimática de un organismo para descarboxilar un aminoácido formando una amina, con la consiguiente alcalinidad. El LIA es un medio diferencial empleado para caracterizar las Enterobacterias. Es muy útil para diferenciar tempranamente cepas de Salmonella y Arizona de Citrobacter.
    •  Urea: Esta prueba determina la capacidad de un organismo para desdoblar, la Urea, formando dos moléculas de amoniaco por acción de la enzima ureasa. Esta prueba se utiliza para diferenciar los organismos del género Proteus rápidamente ureasas positivos de otros miembros de las Enterobacterias.
    • Prueba del medio Triple Sugar Iron (TSI): Esta prueba determina la capacidad de un organismo de atacar un hidrato de carbono específico en un medio de crecimiento básico, con la producción o no de gases, junto con la determinación de posible producción de ácido sulfhídrico.

Las Técnicas de API, son un recurso rápido para el diagnóstico bacteriano, consiste en tiras que contiene microtubos para evaluar las reacciones específicas de las bacterias. Este método da un patrón de reacción que difiere entre especies y subespecies; este recurso es utilizado en etapas finales de la identificación bacteriana. El Laboratorio de Bacteriología de alimentos cuenta con:

  • API 20 E: EL sistema de API 20 E facilita en 24 horas la identificación de Enterobacterias. También puede identificar otras bacterias gram negativas en 24 a 48 horas. Esta prueba posee los substratos deshidratados para la demostración de la actividad enzimática y fermentación de carbohidratos. Los substratos se reconstituyen por la adición de una suspensión bacteriana. Después de la incubación los productos metabólicos se detectan por sistemas indicadores o por la adición de reactivos.
  • API Listeria: El API Listeria contiene 10 pruebas para obtener en 24 horas la identificación bioquímica de aislamientos de Listeria. Esta prueba abarca el 85% de las cepas de Listeria, también se puede diferenciar entre Listeria monocytogenes y L. innocua en base a la ausencia de arilamidas.

Fuente:

  • J Bille, B Catimel, E Bannerman, C Jacquet, M N Yersin, I Caniaux, D Monget, and J Rocourt, API Listeria, a new and promising one-day system to identify Listeria isolates, Centre National de Référence des Listeria, Centre Hospitalier Universitaire Vaudois, Lausanne, Switzerland, Appl Environ Microbiol. 1992 June; 58(6): 1857–1860.
  • Raúl García Tinajero, Rodolfo Córdoba Ponce, Manual Ilustrado para Laboratorio de Bacteriología y Micología Veterinaria, México, 1998
  • Toronto Medical Laboratories/ Mount Sinai Hospital Microbiology Department Policy and Procedure Manual, Identificaction of Enterobacteriaceae (API 20E), Canadá, 2002.